當前位置：TSZ Elisa試劑盒在細胞免疫熒光中的應用
點擊次數(shù)：925 更新時間：2017-07-19
I、TSZ Elisa試劑盒步驟：
一、固定：
PBS 5min×3次 振蕩洗滌制作好的細胞爬片。
固定液覆蓋細胞，RT 靜置5min。
PBS 5min×3次 振蕩洗滌。
二、通透化：
通透液覆蓋細胞，RT 靜置30min。
PBS 5min×3次 振蕩洗滌。
三、封閉：
封閉液覆蓋標本表面37℃孵育h。
四、一抗孵育：
一抗以合適濃度稀釋PBS，覆蓋標本表面。
4℃孵育過夜，第二天37℃復溫h。
PBS 5min×3次 振蕩洗滌。
五、TSZ Elisa試劑盒二抗孵育：
fitC標記二抗以合適濃度稀釋于PBS，覆蓋標本表面。
37℃避光孵育<60min。
PBS 5min×3次 避光 振蕩洗滌。
六、染核：
新鮮稀釋Hoechst覆蓋細胞表面，RT避光靜置<0min。
PBS 5min×3次 避光 振蕩洗滌。
七、封片：
在干凈的載玻片上滴一滴封片劑，將爬片的細胞面扣在封片劑上。
八、鏡檢，4℃避光保存。
II、注：
、細胞密度要合適，狀態(tài)較好。
2、從孵育二抗開始要避光(關閉室內日光燈即可)。
3、完成后及時鏡檢，照相;分別用不同波長激發(fā)熒光，在Photoshop軟件下合成一張圖。
III、試劑配制：
、固定液：4%多聚甲醛/PBS：
4g多聚甲醛，50～80mlPBS，加熱至60℃，持續(xù)攪拌至*溶解，(通常需滴加少許n NaOH才能使溶液清亮)，定容00ml，RT保存。
2、通透液：0.5 %(v/v)TritonX-00/PBS
3、封閉液：正常山羊血清稀釋于PBS;或商品化封閉液成品。
4、Hoechst：Hoechst33258即可。
5、TSZ Elisa試劑盒封片劑：50%(v/v)甘油/PBS。
